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  • 色谱分离的基本原理

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    文档作者:Wu Chen
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    高机械强度和高的比表面积.
    可利用直接的广泛的表面键合反应来满足正相,反相,离子交换,疏水作用色谱和体积排除色谱的需求.
    高效.
    重现性好.
    pH 适用范围为pH 2-8.
    具有容易导致强碱性物质拖尾的,表面活性和带酸性的硅羟基.
    聚合物基质材料
    交联苯乙烯,二乙烯基苯和甲基苯烯酸酯.
    pH 稳定性好:pH 1- 13.
    可以在很宽的范围内进行表面化学处理以满足反相色谱,离子交换色谱,疏水作用色谱和体积排阻色谱的需求.
    在中等 pH 条件下对强碱性物质具有更好的峰形.
    填料的体积随着流动相的不同而改变,如膨胀或收缩.
    分离效率相对硅胶而言比较低
    重现性不好
    硅胶外形的影响
    无定型硅胶:
    最初的 HPLC 填料
    粒径 >5 m
    柱床稳定性差
    比表面积较小
    价格便宜
    球形硅胶:
    现代 HPLC 填料
    粒径小 (5 m, 3 m, 1,000 nm
    对大分子的分离效果理想,如多肽,核苷和高分子
    300 – 1,000 nm
    对小分子的分离效果理想 (MW < 4,000 to 130,000), 例如药物分子,传统的中药和小分子的缩氨酸
    60 – 150 nm
    对 HPLC 分析没有用,会引起峰形拖尾和较低的分离效率
    < 60 nm
    作用和效能
    孔径
    硅胶粒径的影响
    常用于半制备色谱柱
    7 – 10 m
    常用于制备色谱柱
    10 – 20 m
    常应用于超快速分离, high throughput, 分离度高
    < 2 m
    常用于分析柱上的快速分离,色谱柱短,节省溶剂
    3 – 3.5 m

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